Método Simples e Rápido para Detecção de RNA no Vírus da Dengue a Partir de Meio de Cultura
CALVO, Thyago Leal ; ARRUDA, Rívia Aparecida R. ; Neves, Adriana Freitas
Resumo:
Dentre os métodos que podem ser utilizados para a detecção dos tipos virais do vírus causador da dengue (DENV), destaca-se a Transcrição Reversa (RT) seguida da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). No presente trabalho demonstrou-se uma metodologia alternativa para a conversão de RNA viral em cDNA, utilizando-se o meio de cultura celular diretamente na RT. Os sorotipos DENV (1, 2, 3 e 4) foram propagados em meio de cultura contendo células C6/36 da larva do mosquito Aedes albopictus, o qual foi utilizado diretamente na RT, tendo como preparo prévio apenas uma agitação vigorosa em aparelho tipo vórtex, do meio de cultura contaminado, e incubação da amostra a 95ºC por 10 min. O cDNA obtido foi submetido à PCR, analisado por eletroforese em gel de agarose 1,2% (m/v) e fotodocumentado. A extração com Trizol Reagent® também foi utilizada, de acordo com as recomendações do fabricante, para fins de comparação entre métodos. Os dados obtidos demonstraram que o método direto de detecção viral por RT-PCR foi igualmente eficiente quando comparado à extração por Trizol, apresentando a vantagem de ser mais rápido, ter menores custos e ainda diminuir a possibilidade de degradação do RNA por contaminação, uma vez que reduz o manuseio da amostra.
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DOI: 10.5151/9788580391619-13
Como citar:
CALVO, Thyago Leal; ARRUDA, Rívia Aparecida R.; NEVES, Adriana Freitas; "Método Simples e Rápido para Detecção de RNA no Vírus da Dengue a Partir de Meio de Cultura", p. 211-224. Estudos interdisciplinares em ciências biológicas, saúde, engenharias e gestão. São Paulo: Blucher, 2016.
ISBN: 9788580391619, DOI 10.5151/9788580391619-13