CONSTRUÇÃO DE UMA BIBLIOTECA RANDÔMICA DE OLIGONUCLEOTIDEOS CONTENDO O PROMOTOR DA T7 POLIMERASE PARA A SÍNTESE, IN VITRO, DE RNA

Silva, Amanda Gabrielle Da ; Marangoni, Karina ; Goulart, Luiz Ricardo ; Neves, Adriana Freitas

Resumo:

O método, in vitro, de seleção de ligantes por enriquecimento exponencial (SELEX) vem sendo amplamente aplicado na caracterização de ácidos nucleicos estruturalmente funcionais, chamados aptâmeros ligantes a um alvo. Os aptâmeros são pequenas moléculas de DNA em fita simples ou RNA, os quais apresentam alta sensibilidade e afinidade a um alvo, que pode ser proteína, células, vírus, ácidos nucleicos, vitaminas, dentre outros. A seleção de aptâmeros é feita por meio de biblioteca randômica de oligonucleotideos sintetizados quimicamente, sendo estas constituídas por uma região aleatória flanqueada por regiões conservadas. Para a seleção dos aptâmeros de RNA, a biblioteca randômica de oligonucleotideos de DNA deve ser transcrita in vitro em uma biblioteca de RNA. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo otimizar um processo para a síntese de uma biblioteca randômica de oligonucleotideos contendo o promotor da T7 RNA Polimerase (T7 RNAP) para posterior aplicação na seleção de aptâmeros de RNA. Um pool de DNA genômico humano foi utilizado como fonte para a biblioteca, este pool foi sonicado em diferentes tempos, para se verificar a melhor condição para geração da biblioteca. O produto obtido após 60 minutos foi amplificado por PCR, incorporando sequências fixas por meio de primers, dentre os quais o primer senso continha o promotor da T7 RNAP. Os produtos amplificados foram analisados por eletroforese em gel de agarose e fotocumentados, sendo que os fragmentos variaram de aproximadamente 80à 600 nucleotídeos. O método utilizado demonstrou ser útil na construção de bibiliotecas randômicas de RNA com aplicabilidade na seleção de aptâmeros.

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Física, Matemática e Computação

DOI: 10.5151/9788580391152-V4_Cap8

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Como citar:

SILVA, Amanda Gabrielle Da; MARANGONI, Karina; GOULART, Luiz Ricardo; NEVES, Adriana Freitas; "CONSTRUÇÃO DE UMA BIBLIOTECA RANDÔMICA DE OLIGONUCLEOTIDEOS CONTENDO O PROMOTOR DA T7 POLIMERASE PARA A SÍNTESE, IN VITRO, DE RNA", p. 117-126. Coletânea Interdisciplinar em Pesquisa, Pós-Graduação e Inovação - Vol. 4. São Paulo: Blucher, 2015.
ISBN: 9788580391152, DOI 10.5151/9788580391152-V4_Cap8