Etapa 6 - Confirmação da Edição Gênica (Nocauteamento): Ensaio Surveyor, Ensaio por Tide, PCR Quantitativo em Tempo Real (Qrt-PCR), PCR Genômico, Western-Blotting e Sequenciamento de Sanger
Moraes-Almeida, Mariele Santos ; Jesus-Ferreira, Henrique César ; Leal-Lopes, Camila ; Carreira, Ana Claudia Oliveira ; Sogayar, Mari Cleide ; Machado, Raquel Arminda Carvalho
Resumo:
No tocante à ferramenta CRISPR/Cas9, é de extrema importância a realização de experimentos que confirmem a edição gênica pela endonuclease Cas9. As técnicas utilizadas para esse fim podem envolver o Ensaio Surveyor (que utiliza a enzima T7 endonuclease), o Ensaio por TIDE (tracking of indels by decompositions), o PCR do DNA genômico, o PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR), o western blotting e o Sequenciamento de Sanger.
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DOI: 10.5151/9786555501278-06
Referências bibliográficas
- Lewin, B. GenesIX. 9. ed. Artmed;2008.
- Li Y, etal. Genome-wide CRISPR screen for Zika virus resistance in human neural cells. Volume116. PNAS, 2016. p: 9527-9532.
- Lima LM. Conceitos básicos em técnicas de biologiamolecular. Embrapa, 2008.
Como citar:
MORAES-ALMEIDA, Mariele Santos; JESUS-FERREIRA, Henrique César; LEAL-LOPES, Camila; CARREIRA, Ana Claudia Oliveira; SOGAYAR, Mari Cleide; MACHADO, Raquel Arminda Carvalho; "Etapa 6 - Confirmação da Edição Gênica (Nocauteamento): Ensaio Surveyor, Ensaio por Tide, PCR Quantitativo em Tempo Real (Qrt-PCR), PCR Genômico, Western-Blotting e Sequenciamento de Sanger", p. 59-70. Edição Gênica por CRISPR/Cas9: Da Teoria à Prática: Da Teoria à Prática. São Paulo: Blucher, 2022.
ISBN: 9786555501278, DOI 10.5151/9786555501278-06