Etapa 4 - Confirmação do Plasmídeo Recombinante: Preparo de Amostras de DNA Plasmideal Para Sequenciamento e Análise dos Cromatogramas
Moraes-Almeida, Mariele Santos ; Jesus-Ferreira, Henrique César ; Leal-Lopes, Camila ; Carreira, Ana Claudia Oliveira ; Sogayar, Mari Cleide ; Machado, Raquel Arminda Carvalho
Resumo:
O sequenciamento é necessário para se confirmar a inserção da sequência-guia no vetor. O método mais acessível de sequenciamento, no momento, é o de Sanger, baseado na incorporação de didesoxinucleotídeos (ddNTPs) à cadeia nascente de DNA. Os ddNTPs não possuem o OH- na posição 3’, impedindo a ligação do próximo nucleotídeo, causando, assim, a parada de crescimento da cadeia.
61 downloads
DOI: 10.5151/9786555501278-04
Referências bibliográficas
- Doudna JA,Charpentier E. The new frontier of genome engineering with CRISPR-Cas9. Volume346. Science, 2014. p: 1258096-1258096.
- Gao X, etal. Treatment of autosomal dominant hearing loss by in vivo delivery of genomeediting agents. Volume 553. Nature Research Letter, 2018. p: 217-221.
- Ishino Y,Krupovic M, Forterre P. History of CRISPR-Cas from encounter with a mysteriousrepeated sequence to genome editing technology. Volume 200. Journal ofBacteriology, 2018. p: 1-17.
Como citar:
MORAES-ALMEIDA, Mariele Santos; JESUS-FERREIRA, Henrique César; LEAL-LOPES, Camila; CARREIRA, Ana Claudia Oliveira; SOGAYAR, Mari Cleide; MACHADO, Raquel Arminda Carvalho; "Etapa 4 - Confirmação do Plasmídeo Recombinante: Preparo de Amostras de DNA Plasmideal Para Sequenciamento e Análise dos Cromatogramas", p. 47-50. Edição Gênica por CRISPR/Cas9: Da Teoria à Prática: Da Teoria à Prática. São Paulo: Blucher, 2022.
ISBN: 9786555501278, DOI 10.5151/9786555501278-04