Etapa 2 - Produção dos Plasmídeos Recombinantes: Digestão e Desfosforilação do Plasmídeo, Anelamento e Fosforilação dos RNAS Guias e Reação de Ligação ao Vetor
Moraes-Almeida, Mariele Santos ; Jesus-Ferreira, Henrique César ; Leal-Lopes, Camila ; Carreira, Ana Claudia Oliveira ; Sogayar, Mari Cleide ; Machado, Raquel Arminda Carvalho
Resumo:
Para utilização do sistema CRISPR/Cas9, diversas técnicas de Biologia Molecular são empregadas, sendo que as primeiras a serem colocadas em prática, serão as ferramentas que permitem a construção de uma molécula de DNA recombinante. A princípio, é preciso ter em mãos os plasmídeos e os primers correspondentes à sequência gênica (gRNAs) na qual se deseja realizar a edição. Plasmídeos são moléculas de DNA dupla fita e circulares, que estão naturalmente presentes em bactérias, replicam independentemente do cromossomo bacteriano e, na maioria das vezes, conferem resistência a algum antibiótico ou produzem outras moléculas importantes para a sobrevivência do micro-organismo.
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DOI: 10.5151/9786555501278-02
Referências bibliográficas
- Brinkman EK,Steensel B. Rapid quantitative evaluation of CRISPR genome editing by TIDE andTIDER. CRISPR Gene Editing. Humana Press, New York, NY, 2019. P. 29-44.
- BrockenDJW, Tark-Dame M, Tark-Dame R. dCas9: A versatile tool for epigenome editing.Volume 26. Current Issue in Molecular Biology, 2018. P: 15-32.
- Brown,Terence A. Gene cloning and DNA analysis: an introduction. Wiley-blackwell,2020.
Como citar:
MORAES-ALMEIDA, Mariele Santos; JESUS-FERREIRA, Henrique César; LEAL-LOPES, Camila; CARREIRA, Ana Claudia Oliveira; SOGAYAR, Mari Cleide; MACHADO, Raquel Arminda Carvalho; "Etapa 2 - Produção dos Plasmídeos Recombinantes: Digestão e Desfosforilação do Plasmídeo, Anelamento e Fosforilação dos RNAS Guias e Reação de Ligação ao Vetor", p. 31-40. Edição Gênica por CRISPR/Cas9: Da Teoria à Prática: Da Teoria à Prática. São Paulo: Blucher, 2022.
ISBN: 9786555501278, DOI 10.5151/9786555501278-02